Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Модель ожога крысы для изучения термического ожога кожи на всю толщину и инфекции
Chapters
Summary August 23rd, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Модель, имитирующая клинический сценарий ожоговой травмы и инфекции, необходима для дальнейших исследований ожогов. Настоящий протокол демонстрирует простую и воспроизводимую модель ожоговой инфекции крыс, сравнимую с таковой у людей. Это облегчает изучение ожогов и инфекций после ожога для разработки новых местных методов лечения антибиотиками.
Transcript
Эта модель ожоговой травмы способна воспроизвести клинические ситуации, наблюдаемые у госпитализированных пациентов с ожогами после ожоговых травм, таких как иммунная дисрегуляция и бактериальные инфекции. Этот метод индуцирования ожога у крыс прост в освоении и может быть использован для разработки и оценки новых тропических препаратов для лечения ожоговых ран и инфекций. Эта модель может быть использована для оценки заживления ран, а также прогрессирования бактериальной инфекции в месте ожога.
Этот метод индукции ожога также может быть использован на мышах и других животных моделях для индукции ожогов и для изучения бактериальной инфекции ожоговых ран. Начните подготовку анестезированной крысы к ожоговой травме, перемещая ее по грелке в положении лежа. Используя аппликатор с ватным наконечником, нанесите смазку для глаз на оба глаза, чтобы предотвратить высыхание роговицы.
Побрейте спинную область крысы электрической машинкой для стрижки в большом прямоугольнике от лопаток до основания хвоста. Сотрите выпавшие волоски с выбритого участка, используя салфетку, смоченную в физиологическом растворе. Нанесите лосьон для удаления волос на выбритую область с помощью аппликатора с ватным наконечником.
Через три минуты дважды протрите участок влажной марлевой губкой, чтобы удалить лосьон и предотвратить раздражение кожи. Выключите изофлуран и удалите носовой конус, прежде чем помещать крысу в клетку для восстановления. В день эксперимента с ожоговой травмой установите температуру водяной бани на 97 градусов по Цельсию и за час до эксперимента поместите 420 граммов четырех медных стержней в водяную баню.
Как только крыса перестает реагировать на ущипывание пальцев ног на всех конечностях, поместите ее на грелку в положении лежа и введите 20 миллиграммов морфина на килограмм массы тела через внутрибрюшинный или IP-корень для обезболивания. Далее проверьте температуру водяной бани. Установите таймер и наденьте термостойкие перчатки.
Возьмите один нагретый медный стержень с водяной бани и прикоснитесь им к спинной области в течение семи секунд. Немедленно нанесите следующие три ожога один за другим, используя по одному стержню на место ожога, и произведите примерно 20% полного контактного ожога общей площади поверхности тела. После ожога реанимируйте животное, введя 0,1 миллилитра на грамм массы тела лактатного раствора Рингера через ИП-маршрут.
После этого выключите изофлуран. Снимите носовой конус и положите крысу на нагревательный коврик. В день ожога и инфекции центрифугируют культуру Pseudomonas aeruginosa или Staphylococcus aureus отдельно по 4 000 г в течение 5 минут.
Промойте гранулу обычным физиологическим раствором, прежде чем разбавлять гранулу физиологическим раствором до оптической плотности 0,1 на 600 нанометре. Разбавьте 200 микролитров бактериальной суспензии 800 микролитрами физиологического раствора и получите желаемый бактериальный инокулят 2 на 10 до 7-х колониеобразующих единиц или КОЕ на миллилитр. Через 15 минут после ожога подкожно введите 50 микролитров разбавленного инокулята бактерий рядом с областью ожога с помощью иглы 29 калибра.
Поместите крысу на грелку для восстановления. Через 15-20 минут переведите выздоровевшее животное в чистую клетку. Сразу после ожога оцените повреждение кожи морфологически с точки зрения цвета и края.
После эвтаназии проанализируйте общий анализ крови, чтобы определить влияние индукции ожога на иммунную систему хозяина. Соберите ткань усыпленной крысы в 10-миллилитровую пробирку для сбора. Гомогенизируют образцы с помощью тканевого гомогенизатора и последовательно разбавляют тканевые гомогенаты в нормальном физиологическом растворе.
Планшет 100 микролитров неразбавленного гомогената и все разведения каждого образца ткани, собранного у крыс, инфицированных P.Aeruginosa, на пластинах цетримидного агара. После инкубации планшетов в течение 16-18 часов при температуре 37 градусов Цельсия в инкубаторе подсчитайте колонии бактерий на пластинах. Умножьте их на коэффициент разбавления, чтобы получить количество КОЕ на миллилитр, и нормализуйте его с весом ткани, чтобы рассчитать программную ткань КОЕ.
Этот высоковоспроизводимый протокол привел к ожоговой травме третьей степени на всю толщину у крыс. Цвет ожоговой травмы изменился с белого на коричневый через 24 часа до 72 часов после ожога. В гистологическом анализе образцы кожи обожженных животных показали повреждение всех слоев через 24, 48 и 72 часа после ожоговой травмы, тогда как неожоговая кожа показала четкое различие слоев эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки.
В образцах обожженной кожи наблюдалось разрушение эпидермального слоя и повреждение дермы на всю толщину подкожно-жировой клетчаткой и скелетными мышцами. В течение 24 часов после сжигания глубина ожога на всю толщину составляла более 2,61 миллиметра. При оценке бактериального клиренса бактериальное восстановление наблюдалось у всех крыс с ожоговыми травмами.
Во время инфекции P.aeruginosa PAO1 количество бактерий, извлеченных через 24 часа после заражения с кожи обожженной крысы, было меньше, чем при первоначальном посеве 1 на 10 к 6-й КОЕ. Однако он увеличился через 48 и 72 часа после заражения. При инфекции S.aureus, ATC25923, увеличение на 2 log 10 наблюдалось во всех точках времени в коже по сравнению с исходным инокулятом, что позволяет предположить, что установление инфекции S.aureus произошло из-за активной репликации в тканях.
Подкожная клетчатка и мышцы показали более высокую бактериальную нагрузку, чем легкие и селезенка. Данные показали, что у обожженных крыс развилась системная инфекция через 24 часа после прививки P.aeruginosa и через 48 часов после инокуляции S.aureus. Полностью удалите волосы на спине крысы и поддерживайте температуру и время индукции ожога, как указано в протоколе.
Оставшиеся волосы и разная температура медных стержней могут повлиять на качество ожога. Модель ожога крыс может быть изучена для оценки новых местных терапевтических средств для лечения инфекций ожоговых ран и для оценки различных раневых повязок.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
